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1放射自顯影期間膜對膠片的曝光時間不足。2核酸轉移或結合在尼龍膜上的效率低3目標序列以非常低的拷貝數存在。增加加載到凝膠上的樣品量。4沒有足夠數量的探針序列，增加探針的濃度或加入10%硫酸葡聚糖，這樣減少了溶劑體積，可以到到相同的效果。5沒有探針同源性。6雙鏈DNA探針未變性，或者，探針檢測儀性能下降。在使用RNA探針時發生可能更大。7探針的比活性太低。考慮諸如標記反應中的探針濃度、放射性標記的三磷酸鹽的半衰期等因素。8雜交和/或洗滌過程中試驗方法不佳：1）增加鹽的濃度。2）...

常見問題Q1：標記方法有哪幾種？A1：（1）切口平移法（2）隨機引物法（3）末端標記法（4）單鏈DNA探針標記（5）寡核苷酸探針標記法Q2：探針標記物的分類有幾種？A2：（1）探針標記物有放射性核素與非放射性物質兩種。放射性核素標記敏感性高，可檢測pg水平的核酸，但因不易長期保存，且存在放射性污染等問題，現已較少應用。（2）非放射性物質常用的有生物素、地高X等，非放射性探針安全、穩定、操作方便并且經濟，但敏感性較低，近年來，由于雜交信號檢測方法的改進，檢測的敏感性得到了很大提...

核酸雜交(Nucleicacidhybridization)，又稱核酸分子雜交。威尼德分子雜交儀原理：是核酸變性和復性理論。雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開形成單鏈，當理化因素消除后，具一定同源性的兩條(探針和待測核苷酸序列)單鏈在適宜的溫度及離子強度條件下，可按堿基互補配對原則特異性地復性形成雙鏈。核酸分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的二條單鏈之間進行。分類：核酸分子雜交按作用環境不同分為固相核酸分子雜交和液相核酸分子雜交。一、固相核酸分...

硝酸纖維素膜(nitrocellulosefiltermembrane，簡稱NC膜)，NC膜在NorthernBlot、SouthernBlot、WesternBlot中都需要用到，雜交技術有固相雜交和液相雜交之分。固相雜交技術目前較為常用，先將待測核酸結合到一定的固相支持物上，再與液相中的標記探針進行雜交。固相支持物常用硝酸纖維素膜。PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidenefluoride）是蛋白質印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔徑有...

Q1:PVDF膜和硝酸膜結合蛋白的原理是什么？A1:一般而言，硝酸纖維素膜是通過疏水作用來和蛋白質相聯，若反復洗幾次后，蛋白容易掉下來，效果較差。尼龍膜主要通過它膜上的正電荷和蛋白接合（注：常用的PVDF膜即帶正電荷的尼龍膜），同時也有疏水作用，但相對較弱。這樣的話，PVDF膜和蛋白接合較牢，不易脫落，效果較好。Q2:做組織樣品的westernblot的時候，處理樣品有什么訣竅？A2:必須進行研磨、勻漿、超聲處理，蛋白質溶解度會更好，離心要充分，膜蛋白需用更劇烈的方法抽提，低...

經典實驗步驟是將提取的蛋白電泳—轉膜---一抗孵育---二抗孵育---底物顯色---分析。我這幾天幾乎都在重復著這個過程，現在將自己試驗過程記錄下來，和大家一起分享，希望對新手有所幫助。1.蛋白提取傳統方法是(1)組織稱重(2)利用液氮、研缽粉碎組織塊(3)加入RIPA緩沖液，PMSF(4)勻漿（15,000轉/分*1分鐘）維持4℃(5)加入PMSF冰上孵育30分鐘，移入離心管4℃離心15分鐘(6)上清液為細胞裂解液可分裝-20℃保存。一部分進行Bradford比色法測定蛋白...

紫外線是指通過棱鏡將自然光分成赤、橙、黃、綠、青、藍、紫七色光,波長較紫色光更短的一類光線的總稱．它廣泛存在于自然界中,與人的生活密切相關。根據生物效應的不同,將紫外線按照波長劃分為四個部分:A波段(UVA),又稱為黑斑效應紫外線(400～315nm);B波段(UVB),又稱為紅斑效應紫外線(315～280nm);C波段(UVC),又稱為滅菌紫外線(280～100nm);D波段(UVD),又稱為真空紫外線(VacuumeUV)(200～10nm)。很多年之前，紫外線就已被用于...

威尼德紫外交聯儀：在Northernblotting、Southernblotting、EMSA等尼龍膜、硝酸纖維素膜的交聯、Sterilization(滅菌)、DNANicking(DNA缺失)的應用。紫外交聯技術是一種常用于材料科學和化學領域的重要技術手段。隨著材料研究的不斷深入，紫外交聯儀逐漸成為了廣泛應用的分析設備。紫外交聯儀利用紫外光對材料進行照射，通過能量的輸入和材料分子之間的相互作用，實現材料的共價鍵形成或斷裂。當紫外光照射在材料上時，光能激發材料內部的電子，使...